亞磷酰胺，也稱為amidite，是一種用于合成寡核苷酸的化合物，寡核苷酸是短鏈核苷酸。它們由連接到亞磷酰胺基團(tuán)的核苷堿基（腺嘌呤、鳥嘌呤、 胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶）組成，亞磷酰胺基團(tuán)能夠在合成過(guò)程中與不斷增長(zhǎng)的核苷酸鏈形成共價(jià)鍵合。

寡核苷酸合成中的亞磷酰胺

亞磷酰胺主要用于構(gòu)建寡核苷酸序列的過(guò)程，該過(guò)程分為多個(gè)步驟，通常為三步或四步。每個(gè)步驟都涉及特定的反應(yīng)和純化步驟，以將單個(gè)核苷酸添加到不斷增長(zhǎng)的寡核苷酸鏈中并組裝所需的更長(zhǎng)序列。在合成過(guò)程中，亞酰胺被激活并附著在固體載體上，例如樹(shù)脂或玻璃珠。通過(guò)一系列偶聯(lián)、脫保護(hù)和洗滌步驟，寡核苷酸鏈按照預(yù)先定義的 amidites 序列一次延長(zhǎng)一個(gè)核苷酸。合成完成后，寡核苷酸從固體支持物上釋放并純化以供進(jìn)一步應(yīng)用（圖1）。

該過(guò)程已通過(guò)高通量合成器和固相合成技術(shù)的進(jìn)步實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，從而能夠更快、更高效地生產(chǎn)合成寡核苷酸。這種自動(dòng)化方法能夠快速、高效地合成用于各種應(yīng)用的定制寡核苷酸，例如 DNA 測(cè)序、基因合成和分子診斷。

最近，弗萊堡大學(xué)的 ABMS 實(shí)驗(yàn)室提出了一鍋液相合成技術(shù)，該技術(shù)涉及在單個(gè)反應(yīng)容器或系統(tǒng)內(nèi)發(fā)生的整個(gè)過(guò)程，無(wú)需在核苷酸添加之間進(jìn)行中間純化步驟，從而簡(jiǎn)化了過(guò)程減少總體合成時(shí)間。在這種方法中，所需的核苷酸、亞酰胺和試劑組合在一起，并經(jīng)歷一系列反應(yīng)和條件，同時(shí)促進(jìn)偶聯(lián)和脫保護(hù)（圖 2）。

該方法具有簡(jiǎn)單和快速的優(yōu)點(diǎn)，但與傳統(tǒng)的逐步合成方法相比，實(shí)現(xiàn)高純度和產(chǎn)率可能具有挑戰(zhàn)性。兩種技術(shù)之間的選擇取決于所需的寡核苷酸長(zhǎng)度、序列復(fù)雜性、時(shí)間限制以及研究或應(yīng)用的具體要求等因素。研究人員在決定采用哪種方法時(shí)會(huì)考慮成本、效率、可擴(kuò)展性和產(chǎn)品純度等因素。